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河南11选5 > 技术与支持 > 谈一谈TaqDNA聚合酶的选择窍门
谈一谈TaqDNA聚合酶的选择窍门
点击次数:355 发布时间:2017-11-24
常见的DNA聚合酶如Taq、Phanta、Pfu、KOD、Primerstar、Klenow、Bst、Phi29等等。根据耐热性来分可分为耐热酶和常温酶。耐热聚合酶如Taq、Pfu、KOD、Primerstar等,常温聚合酶包括Klenow、Bst、Phi29等。根据保真度来分,高保真聚合酶Pfu、KOD、Phanta等,普通聚合酶Taq等。
那么根据实验目的选择合适的TaqDNA聚合酶。比如:常规的PCR扩增和菌液鉴定,长度小于5kb的片段,保真度要求不高,使用TaqDNA聚合酶扩增即可。选用Mix的形式,混样更加简单,操作更加便捷。如果混样泡沫多,想灭掉泡沫的话,推荐大家使用Green Taq Mix。想要获得较高的产量,可以选择Taq Plus DNA聚合酶,相对于TaqDNA聚合酶扩增性能更强。
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选择热启动酶降低非特异性扩增
在使用TaqDNA聚合酶进行扩增时,有时会出现非特异性扩增,可能的原因可以从模板、引物、体系、程序中一一排查。如模板是否被污染,引物特异性如何,Mg2+浓度偏高等等,其中一个不可忽视的原因是DNA聚合酶的种类是否合适。如果排查了其它原因仍旧有非特异性产物,可以选择热启动酶重新实验,即可有效减少或消除体系中其它产物的积累。常用的热启动酶分为两类:一类是化学法修饰的热启动酶,如Ace Taq ,预变性95℃5-10min即可释放酶活;一类是抗体法修饰的热启动酶,如Champagne Taq ,预变性95℃30s即可释放酶活。使用时注意预变性时间,方能获得满意的扩增效果。
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选择Lamp扩增长片段
大于5Kb的长片段又该如何扩增呢?如果实验对保真度的需求不高,那么就可以使用LAmp DNA聚合酶。其保真度是Taq酶的6倍,可扩增超过20Kb的基因组、cDNA片段,对于低拷贝、低纯度、以及不同GC含量的模板都具有很高的成功率。
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选择高保真酶快速扩增
如果实验对保真度要求较高,在选择TaqDNA聚合酶的时候就需要使用高保真酶,如Pfu、KOD、Primerstar、Phanta等。前三者都属于*代高保真酶,已在市场中广泛使用。
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